IL-10試劑盒是固相夾心法酶聯(lián)免疫吸附實驗(ELISA).已知IL-10濃度的標準品、未知濃度的樣品 加入微孔酶標板內(nèi)進行檢測。先將IL-10和生物素標記的抗體同時溫育。洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再經(jīng)過溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶結(jié)合物,然后加入底物A、B,和酶結(jié)合物同時作用。產(chǎn)生顏色。顏色的深淺和樣品中IL-10的濃度呈比例關(guān)系。 樣品收集、處理及保存方法: 1、 血清……操作過程中避免任何細胞刺激。使用不含熱原 和內(nèi)毒素的試管。收集血液后,1000×g離心10分鐘將血紅 細胞迅速小心地分離。 2、 血漿……EDTA、檸檬酸鹽、肝素血漿可用于檢測。1000×g離心30分鐘去除顆粒。 3、 細胞上清液……1000×g離心10分鐘去除顆粒和聚合物。 4、 組織勻漿……將組織加入適量生理鹽水搗碎。1000×g離心10分鐘,取上清液。 5、 保存……如果樣品不立即使用,應(yīng)將其分成小部分-70℃保存,避免反復(fù)冷凍。盡可能的不要使用溶血或高血脂血。如果血清中大量顆粒,檢測前先離心或過濾。不要在37℃或更高的溫度加熱解凍。應(yīng)在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。 操作注意事項: ● 試劑應(yīng)按標簽說明書儲存,使用前恢復(fù)到室溫。稀稀過后的標準品應(yīng)丟棄,不可保存。 ● 實驗中不用的板條應(yīng)立即放回包裝袋中,密封保存,以免變質(zhì)。 ● 不用的其它試劑應(yīng)包裝好或蓋好。不同批號的試劑不要混用。保質(zhì)前使用。 ● 使用一次性的吸頭以免交叉污染,吸取終止液和底物A、B液時,避免使用帶金屬部分的加樣器。 ● 使用干凈的塑料容器配置洗滌液。使用前充分混勻試劑盒里的各種成份及樣品。 ● 底物A應(yīng)揮發(fā),避免長時間打開蓋子。底物B對光敏感,避免長時間暴露于光下。避免用手接觸,有毒。實驗完成后應(yīng)立即讀取OD值。 ● 加入試劑的順序應(yīng)一致,以保證所有反應(yīng)板孔溫育的時間一樣。 ● 按照說明書中標明的時間、加液的量及順序進行溫育操作。 |