什么是種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基
發(fā)布時間: 2011/1/5 點擊次數(shù): 1940次
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按用途培養(yǎng)基按其用途可分為孢子培養(yǎng)基、種子培養(yǎng)基和發(fā)酵培養(yǎng)基三種。 a 孢子培養(yǎng)基孢子培養(yǎng)基是供菌種繁殖孢子的一種常用固體培養(yǎng)基,對這種培養(yǎng)基的要求是能使菌 體迅速生長,產(chǎn)生較多的孢子,并要求這種培養(yǎng)基不易引起菌種發(fā)生變異。所以對孢子培養(yǎng)基的基本配制要求是:*,營養(yǎng)不要太豐富(特別是有機氮源),否則不易產(chǎn)孢子。如灰色鏈霉在葡萄糖-硝酸鹽-其它鹽類的培養(yǎng)基上都能很好地生長和產(chǎn)孢子,但若加入0.5%酵母膏或酪蛋白后,就只長菌絲而不長孢子。第二,所用無機鹽的濃度要適量,不然也會影響孢子量和孢子顏色。第三,要注意孢子培養(yǎng)基的pH和濕度。生產(chǎn)上常用的孢子培養(yǎng)基有:麩皮培養(yǎng)基、小米培養(yǎng)基、大米培養(yǎng)基、玉米碎屑培養(yǎng)基和用葡萄糖、蛋白胨、牛肉膏和食鹽等配制成的瓊脂斜面培養(yǎng)基。大米和小米常用作霉菌孢子培養(yǎng)基,因為它們含氮量少,疏松、表面積大,所以是較好孢子培養(yǎng)基。大米培養(yǎng)基的水分需控制在21%-50%,而曲房空氣濕度需控制在90%-100%。 b 種子培養(yǎng)基種子培養(yǎng)基是供孢子發(fā)芽、生長和大量繁殖菌絲體,并使菌體長得粗壯,成為活力強的“種子”。所以種子培養(yǎng)基的營養(yǎng)成分要求比較豐富和*,氮源和維生素的含量也要高些,但總濃度以略稀薄為好,這樣可達到較高的溶解氧,供大量菌體生長繁殖。種子培養(yǎng)基的成分要考慮在微生物代謝過程中能維持穩(wěn)定的pH,其組成還要根據(jù)不同菌種的生理特征而定。一般種子培養(yǎng)基都用營養(yǎng)豐富而*的天然有機氮源,因為有些氨基酸能刺激孢子發(fā)芽。但無機氮源容易利用,有利于菌體迅速生長,所以在種子培養(yǎng)基中常包括有機及無機氮源。zui后一級的種子培養(yǎng)基的成分能較接近發(fā)酵培養(yǎng)基,這樣可使種子進入發(fā)酵培養(yǎng)基后能迅速適應(yīng),快速生長。 c 發(fā)酵培養(yǎng)基發(fā)酵培養(yǎng)基是供菌種生長、繁殖和合成產(chǎn)物之用。它既要使種子接種后能迅速生長,達到一定的菌絲濃度,又要使長好的菌體能迅速合成需產(chǎn)物。因此,發(fā)酵培養(yǎng)基的組成除有菌體生長所必需的元素和化合物外,還要有產(chǎn)物所需的特定元素、前體和促進劑等。但若因生長和生物合成產(chǎn)物需要的總的碳源、氮源、磷源等的濃度太高,或生長和合成兩階段各需的*條件要求不同時,則可考慮培養(yǎng)基用分批補料來加以滿足。( 培養(yǎng)基成分和配比的選擇培養(yǎng)基的組分(包括這些組分的來源和加工方法)、配比、緩沖能力,粘度,消毒是否易*,消毒后營養(yǎng)破壞程度,及原料中雜質(zhì)的含量都對菌體的生長和產(chǎn)物形成有影響。但目前還不能*從生化反應(yīng)的基本原理來推斷和計算出適合某一菌種的培養(yǎng)基配方。目前還只能是在生物化學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)等的基本理論指導(dǎo)下,參照前人所使用的較適合于某一類菌種的經(jīng)驗配方,再結(jié)合所用菌種和產(chǎn)品的特性,采用搖瓶、玻璃罐等小型發(fā)酵設(shè)備,對碳源、氮源、無機鹽和前體等進行逐個單因子試驗,觀察這些因子對菌體生長和產(chǎn)物合成量的影響。zui后再綜合考慮各因素的影響,得到一個比較適合本菌種的生產(chǎn)配方,以求得到高產(chǎn)。為了加快試驗時間,可考慮用“正式試驗設(shè)計”等數(shù)學(xué)方法來確定培養(yǎng)基組分和濃度,它可以通過比較少的實驗次數(shù)而得到較滿意的結(jié)果。另外還可通過方差分析,了解哪個因素影響較大,以引起人們的注意。在考慮培養(yǎng)基總體要求時,要注意一些問題。*,考慮碳源、氮源時,要注意快速利用的碳(氮)源和慢速利用的碳(氮)源的相互配合,發(fā)揮各自的優(yōu)勢,避其所短。第二,選用適當(dāng)?shù)奶嫉?。培養(yǎng)基中氮比的影響極為明顯。氮源過多,會使菌體生長過于旺盛,pH偏高,不利于代謝產(chǎn)物的積累,氮源不足,則菌體繁殖量少,從而影響產(chǎn)量,碳源過多,則容易形成較低的pH,若碳源不足,易引起菌體衰老和自溶。另外碳氮比不當(dāng)還會影響菌體按比例地吸收營養(yǎng)物質(zhì),直接影響菌體的生長和產(chǎn)物的形成。菌體在不同的生長階段,其對碳氮比的zui適要求也不一樣。一般碳源因為既作碳架又作能源,因此用量要比氮多。從元素分析來看,酵母菌細(xì)胞中碳氮比約為100:20,霉菌約為100:10;一般工業(yè)發(fā)酵培養(yǎng)基的碳氮比約為100:0.2-2.0;但在氨基酸發(fā)酵中,因為產(chǎn)物中含氮多,所以碳氮比就要相對高一些。例如谷氨酸生產(chǎn)中取碳氮比100:15-21,若碳氮比為100:0.5-2.0,則會出現(xiàn)只長菌體,而幾乎不合成谷氨酸的現(xiàn)象。碳氮比隨碳水化合物及氮源的種類以及通氣攪拌等條件而異,很難確定一個統(tǒng)一的比值。第三,要注意生理酸、堿性鹽和pH緩沖劑的加入和搭配。這是根據(jù)該菌種在現(xiàn)有工藝設(shè)備條件下,其生長合成產(chǎn)物時pH變化情況,以及zui適pH控制范圍等,綜合考慮選用什么生理酸堿性物質(zhì)及其用量,從而保證在整個發(fā)酵過程中pH都能維持在*狀態(tài)(有時也可考慮用中間補料來控制pH)。培養(yǎng)基成分的用量的多少,大部分是根據(jù)經(jīng)驗而來。但有些主要代謝的產(chǎn)物因為它們的代謝途徑比較清楚,所以可以根據(jù)物料平衡計算來加以確定,例如在酒精生產(chǎn)中可根據(jù)淀粉的用量計算灑精的理論產(chǎn)率。從上式可計算出青霉素G的理論得率為每克葡萄糖得1.1克青霉素G。在確定培養(yǎng)基中碳源數(shù)量時,還要考慮用于菌體生長和維持所需的消耗。在選擇培養(yǎng)基所用的有機氮源時,特別要注意原料的來源、加工方法和有效成分的含量。有機氮源大部分為農(nóng)副產(chǎn)品,其中所含的成分受產(chǎn)地、加工、貯藏等的影響較大,常會引起產(chǎn)量的波動。例如黃豆餅粉、花生餅粉、棉子餅粉等,它們的產(chǎn)地不同有機氮的成分和含量也不同,東北大豆含胱氨酸和蛋氨酸的量比華北、江南產(chǎn)的黃豆含量高,有利于鏈霉素的生產(chǎn)。又如豆餅粉加工有熱榨和冷榨兩種,它們對發(fā)酵產(chǎn)品的產(chǎn)量影響就各不相同。在醬油生產(chǎn)中采用熱榨豆餅較好,因為熱榨豆餅中水分含量少,蛋白質(zhì)含量高,易破碎且使用方便。而鏈霉素生產(chǎn)卻以冷榨豆餅為宜。兩種處理方法的豆餅其所含成分見表7-6。低溫貯藏可延長貯存期,若于室溫存放,尤其是夏天,豆餅中的油酯等易氧化變質(zhì),影響微生物生物合成。發(fā)霉變質(zhì)的餅粉對產(chǎn)量也有明顯影響。國外為了穩(wěn)定生產(chǎn),把棉籽餅粉加工制得成分穩(wěn)定的商品藥用培養(yǎng)基,已用于青霉素等發(fā)酵生產(chǎn)。 熱榨豆餅和冷榨豆餅的主要成分含量成分 加工方法 水分(%) 粗蛋白(%)粗脂(%碳水化合物(%)灰分(%) 冷榨 12.12/46.45/6.12/26.24/5.44 熱榨 3.38/47.94/ 3.74/22.84/6.31 糖蜜是制糖工業(yè)的副產(chǎn)物,其工藝有碳酸法和亞硫酸法,這兩種工藝所得糖蜜的成分有所不同,見表7-7。即使同種工藝不同產(chǎn)地的甘蔗(土質(zhì)、氣候)和存放期不同都影響糖蜜的質(zhì)量,所以它的有效成分波動甚大。用甜菜制作的糖蜜,轉(zhuǎn)化糖含量低,PH呈堿性。甘蔗糖蜜轉(zhuǎn)化糖含量,PH呈酸性。還有些發(fā)酵工廠用葡萄糖結(jié)晶后所得的母液作碳源。在制備培養(yǎng)基時水質(zhì)的影響也應(yīng)注意,各地區(qū)的深井水和自來水的質(zhì)量有很大差別。其中微量元素的含量,對成分簡單的孢子培養(yǎng)基或種子培養(yǎng)基有較大的影響。在制酒或啤酒工業(yè)中更要注意選擇水瓶、控制水的硬度、含鐵量、含氯量及氨態(tài)、硝酸態(tài)和亞硝酸態(tài)的氮含量,一般常用電滲析或離子交換樹脂等進行水的純化國。培養(yǎng)基的原料在大規(guī)模工業(yè)生產(chǎn)中用量很大。在選用時,應(yīng)盡就近利用較豐富的廉價原料,設(shè)法降低成本。例如原來生產(chǎn)賴氨酸用山芋漃粉,后來改用山芋粉為碳源,這樣不僅價廉,而且山芋粉中還含有生物素、鎂鹽等,當(dāng)培養(yǎng)基改用山芋粉后,就將可省去原來要加的玉米漿,硫酸鎂,并整個成本降低15%。有些原料在使用前要進行預(yù)處理。如一些谷物或山芋干等農(nóng)產(chǎn)品。使用前要去除雜草、泥塊、石頭、小鐵丁等雜物以免損壞粉碎機。又如要酒精、丙酮、丁醇等的生產(chǎn)中,淀粉原料使用量大,需要預(yù)先進行蒸煮、糊化,使酵母能有效地將其糖化。糊化程度與溫度、時間有關(guān),蒸煮溫度過低使糊化不充分,影響糖化率;反之,則會發(fā)生焦化等情況,影響營養(yǎng)成分,甚至產(chǎn)生黑色素等有害物質(zhì)。為了避免長時間的蒸煮,可將大塊干薯加以粉碎過篩。國外生產(chǎn)抗生素用培養(yǎng)基均通過200目篩子。有些谷物如大麥、高粱、橡子等原料先云皮殼,這樣一方面可防止?中有害物和單寧等帶入發(fā)酵醪(液),影響微生物生長和產(chǎn)物形成;另一方面大量皮殼占去一定體積,降低了設(shè)備的利用率,且堵塞管道,增加流動阻力。在使用糖蜜時,在必要時,也要進行預(yù)處理。例如在檸檬酸生產(chǎn)時,為了去除糖蜜中鐵離子,防止異檸檬酸的產(chǎn)生,要預(yù)先加入黃血鹽云除鐵離子。在酒精生產(chǎn)或酵母生產(chǎn)中若使用糖蜜,則需要預(yù)先進行稀釋、酸化、滅菌、燈清和添加營養(yǎng)鹽等處理。因為糖蜜中干物質(zhì)濃度很大,糖分高、產(chǎn)酸細(xì)菌多,灰分和膠體物質(zhì)也很多,酵母無法生長。 |
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